Perbezaan Utama - Halaman SDS vs Western Blot
Western blotting adalah teknik yang mengesan protein tertentu dari sampel protein. Teknik ini dilakukan melalui beberapa langkah utama: elektroforesis gel, pembuangan, dan hibridisasi. Elektroforesis gel poliakrilamida natrium dodecyl sulfate (SDS Page) adalah sejenis teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk memisahkan protein mengikut ukurannya (berat molekul). Western blot adalah lembaran khas membran blotting yang digunakan untuk memindahkan pola protein yang sama di Halaman SDS. Perbezaan utama antara SDS Page dan western blot adalah bahawa SDS Page membenarkan pemisahan protein dalam campuran sementara western blot memungkinkan pengesanan dan kuantifikasi protein tertentu dari campuran. Kedua-duanya berguna dalam kajian analisis protein.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Halaman SDS
3. Apa itu Western Blot
4. Perbandingan Berdampingan - Halaman SDS vs Western Blot
5. Ringkasan
Apa itu Halaman SDS?
Halaman SDS adalah teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk pemisahan protein. Ia biasanya digunakan dalam biokimia, genetik, forensik dan biologi molekul. Setelah protein diekstraksi dari sampel, protein tersebut dijalankan pada gel yang terdiri daripada SDS dan poliakrilamida. SDS adalah bahan pencuci anionik yang digunakan untuk melaraskan protein (protein denatur) dan untuk memberikan muatan negatif kepada protein linear yang sebanding dengan jisim molekulnya. Poliakrilamida menjadi sokongan padu untuk gel. Protein denaturasi yang bermuatan negatif berpindah ke hujung positif alat melalui gel. Mengikut ukuran protein, kelajuan migrasi berbeza antara protein dan pemisahan berlaku. Oleh itu, halaman SDS berguna untuk pemisahan protein individu berdasarkan ukurannya.
Penyediaan gel poliakrilamida untuk pemecahan protein adalah langkah penting dalam Halaman SDS. Kepekatan poliakrilamida yang betul dan jenis agen penghubung silang yang digunakan sangat mempengaruhi sifat fizikal gel, yang menjadikan pemisahan sebenar protein yang berbeza. Ukuran pori gel harus diuruskan dengan betul untuk pemisahan yang berkesan. Walau bagaimanapun, Halaman SDS dianggap sebagai teknik pemisahan protein beresolusi tinggi.
Teknik Halaman SDS mempunyai batasan utama dalam analisis protein. Oleh kerana SDS mendefinisikan protein sebelum pemisahan, tidak membenarkan pengesanan aktiviti enzimatik, interaksi pengikatan protein, kofaktor protein, dll
Gambar 01: Halaman SDS
Apa itu Western Blot?
Teknik Western blotting memungkinkan pengesanan protein tertentu dari campuran protein dan pengukuran kuantiti dan berat molekul protein. Western blot adalah selaput yang digunakan semasa prosedur pembekuan untuk mendapatkan gambaran cermin corak protein dalam gel SDS- polyacrylamide. Membran yang digunakan untuk pembuangan barat kebanyakannya terdiri dari nitroselulosa atau polyvinylidene difluoride (PVDF). Membran dengan protein yang dipindahkan dapat digunakan untuk mengenal pasti protein yang diinginkan. Ia memerlukan antibodi berkualiti tinggi untuk mengesan protein yang diinginkan dengan hibridisasi. Antibodi itu mengikat antigen spesifiknya dan menunjukkan adanya antigen yang diinginkan yang merupakan protein.
Pemindahan protein dari gel poliakrilamida SDS ke western blot dilakukan dengan menggunakan elektroblotting. Ini adalah kaedah yang berkesan dan cepat yang menyebabkan protein elektrofores keluar dari gel dan masuk ke membran nitroselulosa (western blot).
Gambar 02: Blot Barat
Apakah perbezaan antara Halaman SDS dan Western Blot?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
Halaman SDS vs Western Blot |
|
| Halaman SDS adalah teknik elektroforesis gel. | Western blot adalah teknik yang dilakukan pada membran untuk mengesan protein tertentu dari campuran. |
| Gunakan | |
| Halaman SDS membolehkan pemisahan protein mengikut ukurannya. | Western blot membenarkan pemindahan protein pada gel halaman SDS tanpa mengubah coraknya & membenarkan hibridisasi dengan antibodi tertentu. |
| Kekurangan | |
| Denaturasi protein, kos tinggi, dan kehadiran bahan kimia neurotoksin adalah kelemahan teknik ini. | Teknik ini memakan masa dan memerlukan keadaan terkawal peribadi dan khusus yang berpengalaman. |
Ringkasan - Halaman SDS vs Western Blot
Halaman SDS dan western blot adalah dua kaedah yang terlibat dalam analisis protein. Halaman SDS membolehkan pemisahan protein dengan mudah pada gel mengikut berat molekulnya. Western blot membantu mengesahkan kehadiran dan kuantiti protein tertentu melalui hibridisasi dengan antibodi tertentu. Ini adalah perbezaan antara SDS Page dan western blot.
