Perbezaan Utama - Halaman SDS vs Halaman Asli
SDS dan halaman asli adalah dua jenis teknik elektroforesis gel poliakrilamida yang digunakan dalam Biologi Molekul. Perbezaan utama antara Halaman SDS dan Halaman Asli adalah jenis gel poliakrilamida yang digunakan. Dalam Halaman SDS gel denaturasi digunakan oleh itu, molekul dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, di Native Page, gel tidak denaturasi digunakan. Oleh itu, molekul dipisahkan berdasarkan ukuran, cas dan bentuknya.
Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Halaman) menggunakan gel yang dibuat dengan memolimerisasi monomer akrilamida dengan metilena bisakrilamida. Poliakrilamida lebih keras dan lebih stabil daripada haba. Gel poliakrilamida mempunyai ukuran pori yang lebih kecil yang membolehkan pemisahan protein dengan cekap. Terdapat dua jenis penyediaan Halaman utama iaitu Halaman SDS dan Halaman Asli. Elektroforesis gel SDS atau Sodium-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya. Gel denaturasi digunakan di Halaman SDS. Native Page menggunakan gel yang tidak menentu dan memisahkan protein berdasarkan saiz, cas dan bentuknya (konformasi 3D).
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Halaman SDS
3. Apa itu Halaman Asli
4. Kesamaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli
5. Perbandingan Berdampingan - Halaman SDS vs Halaman Asli dalam Borang Jadual
6. Ringkasan
Apa itu Halaman SDS?
Halaman SDS adalah teknik elektroforetik yang paling biasa digunakan untuk memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya. Gel dibuat dengan menambahkan SDS (Sodium dodecyl sulfate), yang merupakan bahan pencuci. SDS menjadikan protein menjadi monomer. SDS adalah bahan pencuci anionik. Oleh itu, ia menambahkan muatan negatif bersih pada protein dalam julat pH yang luas. Apabila cas negatif bersih diberikan pada molekul protein, kerana variasi cas, struktur kompleks dipecah. Oleh kerana cas negatif, protein menarik ke arah positif. Oleh itu molekul dengan berat molekul yang lebih rendah bergerak lebih cepat pada matriks gel dan dapat dilihat dekat dengan anoda, sedangkan protein dengan berat molekul yang lebih tinggi diperhatikan lebih dekat ke telaga.
Gambar 01: Halaman SDS
Pengikatan SDS ke rantai polipeptida sebanding dengan jisim molekul relatifnya. Oleh itu, jisim molekul juga dapat ditentukan melalui Halaman SDS. Pewarnaan gel SDS Halaman dilakukan dengan pewarnaan biru bromofenol. Aplikasi halaman SDS berkisar pada tahap yang lebih luas di mana ia dapat digunakan untuk menganggar jisim molekul relatif dan untuk menentukan kelimpahan relatif protein dalam campuran protein. Halaman SDS juga dapat digunakan untuk menentukan sebaran protein dalam campuran protein. Halaman SDS juga digunakan untuk memurnikan dan menilai protein. Ini digunakan sebagai prosedur awal untuk pembetulan dan hibridisasi barat, yang pada gilirannya digunakan untuk pemetaan dan pengenalpastian protein.
Apakah Halaman Asli?
Elektroforesis gel Native Polyacrylamide (Halaman Asli) menggunakan gel yang tidak mendenaturasi. Oleh itu, SDS atau ejen denaturasi lain tidak ditambahkan ke dalam matriks gel. Di Halaman Asli, pemisahan protein berdasarkan cas dan ukuran protein. Oleh itu, mobiliti protein bergantung pada cas dan ukuran protein.
Pengisian protein bergantung pada rantai sisi asid amino. Sekiranya rantai sisi dicas negatif, protein akan menerima cas negatif keseluruhan dan sebaliknya. Protein mengekalkan konformasi 3D kerana lipatan yang berlaku. Hasil lipatan dari beberapa jenis ikatan dalam protein seperti ikatan disulfida, interaksi hidrofobik dan ikatan Hidrogen. Oleh itu, jika Halaman asli dibawa pada pH netral, protein akan dipisahkan mengikut bentuk molekul protein. Oleh itu, Native Page boleh digunakan sebagai teknik sensitif untuk mengesan perubahan cas atau konformasi protein.
Kelebihan utama Halaman asli adalah bahawa protein yang digunakan untuk analisis Halaman dapat dipulihkan dalam keadaan asalnya setelah analisis Halaman, kerana protein tidak terganggu selama prosesnya. Native Page adalah teknik throughput yang agak tinggi, dan kestabilan protein meningkat.
Gambar 02: Halaman Asli
Setelah selesai menjalankan gel, gel Halaman Asli dapat dilihat dengan pewarnaan dengan bromophenol biru atau pewarna lain yang sesuai. Aplikasi Native Page merangkumi pemisahan protein berasid termasuk glikoprotein seperti eritropoietin rekombinan manusia atau pengenalan protein yang terdapat dalam Bovine Serum Albumin (BSA).
Apakah Persamaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli?
- Kedua-dua sistem SDS Page dan Native Page menggunakan gel poliakrilamida sebagai matriks gel.
- Kedua-duanya digunakan untuk pemisahan dan pengenalpastian protein.
- Kedua-duanya menggunakan mobiliti elektroforetik untuk memisahkan sebatian.
- Kedua-duanya boleh dilakukan secara menegak atau mendatar (kebanyakannya dilakukan sebagai penyediaan Halaman menegak kerana panjang larian lebih banyak).
- Alat elektroforesis termasuk tangki gel, sisir, bekalan kuasa diperlukan untuk operasi kedua teknik.
- Visualisasi gel dapat dilakukan dengan kaedah pewarnaan dalam kedua teknik tersebut.
Apakah Perbezaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
Halaman SDS vs Halaman Asli |
|
| Halaman SDS atau Sodium-dodecyl sulfate Page memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya, dan ia menggunakan gel denaturasi. | Native Page menggunakan gel yang tidak menentu dan memisahkan protein berdasarkan saiz, cas dan bentuknya (konformasi 3D). |
| Jenis Gel | |
| Gel denaturasi digunakan di halaman SDS. | Gel bukan denaturasi digunakan di halaman asli. |
| Kehadiran SDS | |
| SDS hadir sebagai bahan pencuci untuk memberikan cas negatif pada sampel di halaman SDS. | SDS tidak terdapat di halaman asli. |
| Asas Pemisahan | |
| Pemisahan protein bergantung pada berat molekul protein di halaman SDS. | Pemisahan bergantung pada ukuran dan bentuk molekul protein di halaman asli. |
| Kestabilan Protein | |
| Kestabilan protein rendah di halaman SDS. | Kestabilan protein tinggi di halaman asli. |
| Pemulihan Protein Asal | |
| Tidak mungkin kerana sudah dilekatkan di halaman SDS. | Mungkin di halaman asli. |
Ringkasan - Halaman SDS vs Halaman Asli
Halaman SDS dan Halaman Asli adalah dua jenis teknik elektroforesis gel Polyacrylamide yang digunakan untuk memisahkan protein. Halaman SDS dirawat dengan detergen yang disebut SDS. SDS memberikan cas negatif keseluruhan kepada protein, yang kemudian menghasilkan denaturasi protein. Oleh itu, protein dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, teknik Halaman Asli tidak menggunakan ejen denaturasi. Oleh itu protein sama ada dipisahkan berdasarkan ukuran atau bentuknya. Ini adalah perbezaan antara halaman SDS dan halaman asli.
