PCR vs PCR masa nyata
Reaksi rantai PCR atau Polimerase adalah penemuan yang revolusioner dalam biologi molekul moden, yang pertama kali dikembangkan oleh ahli kimia Kary Mullis pada tahun 1983. Ia membolehkan satu urutan tunggal dalam DNA kompleks diperkuat untuk analisis. Idea asas PCR adalah bahawa dua primer, yang saling melengkapi dengan helai bertentangan urutan DNA, berorientasi satu sama lain; primer menghasilkan helai pelengkap, masing-masing mengandungi primer yang lain. Oleh itu, hasilnya adalah sebilangan besar urutan yang sesuai dengan DNA yang terletak di antara dua primer. Enzim polimerase DNA digunakan untuk memperluas primer dalam PCR. DNA polimerase adalah enzim termostabil, dan memiliki kemampuan bertahan dalam suhu tinggi (94 hingga 95 ° C) yang digunakan untuk denaturasi DNA templat.
PCR melibatkan tiga langkah, iaitu putaran denaturasi berulang, penyepuhlanjutan primer, dan sintesis DNA. Mesin termocycler digunakan untuk melakukan tindak balas ini sehingga dapat diprogram untuk mengubah suhu dengan cepat dan tepat. Aplikasi PCR adalah penyiasatan jenayah, cap jari DNA, pengesanan patogen, dan analisis DNA spesies manusia awal.
Apa itu PCR Konvensional?
Terdapat tiga peringkat utama PCR konvensional, iaitu; Tahap penguatan DNA, pemisahan PCR, dan pengesanan produk. Pemisahan segmen DNA biasanya dilakukan dengan elektroforesis gel agarosa. Produk kemudian diwarnai dengan etheiduim bromide. Akhirnya, pengesanan dicapai dengan visualisasi tali ke gel di bawah cahaya UV. Oleh itu, hasil akhir PCR konvensional tidak dinyatakan sebagai angka. Biasanya PCR konvensional hanya dapat mengesan satu parameter.
Apakah PCR Masa Nyata?
PCR masa nyata dapat mengesan penguatan produk, kerana produk disintesis. Dengan perkembangan teknologi, PCR telah menjadi teknik yang sangat popular, terutama untuk pengesanan dan pengenalpastian bakteria dalam makanan. PCR masa nyata menggunakan sistem pewarna pendarfluor dan termosikler yang dilengkapi dengan keupayaan mengesan pendarfluor.
Apakah perbezaan antara PCR Konvensional dan PCR Masa Nyata?
• PCR konvensional lebih memakan masa kerana menggunakan elektroforesis gel untuk menganalisis produk PCR yang diperkuat. Sebaliknya, PCR masa nyata kurang memakan masa kerana dapat mengesan penguatan pada fasa awal reaksi.
• PCR masa nyata mengumpulkan data pada fasa pertumbuhan eksponensial PCR sementara PCR tradisional mengumpulkan data pada titik Akhir reaksi.
• Hasil titik akhir PCR konvensional mungkin tidak begitu tepat, tetapi hasil PCR masa nyata sangat tepat.
• PCR masa nyata lebih sensitif daripada PCR konvensional.
• PCR konvensional mempunyai resolusi yang sangat buruk sementara PCR masa nyata dapat mengesan perubahan yang sangat sedikit kerana resolusi tinggi.
• Pengesanan titik akhir PCR konvensional mempunyai jarak dinamik pendek sementara pengesanan PCR masa nyata mempunyai julat dinamik yang luas.
• Tidak seperti PCR konvensional, teknik pengesanan automatik terdapat dalam PCR masa nyata.
• PCR konvensional sangat canggih dan lebih banyak tenaga kerja daripada PCR masa nyata.
• Tidak seperti PCR masa nyata, PCR konvensional tidak dapat membezakan antara bakteria mati dan hidup.
• PCR masa nyata menggunakan sistem pewarna pendarfluor untuk mengesan produk sementara PCR konvensional menggunakan ethidium bromide dan sinar UV untuk memvisualisasikan jalur dalam medium agarose gel.
