Perbezaan Utama - cDNA vs Genomic Library
Terdapat dua jenis perpustakaan DNA utama yang dibina oleh saintis menggunakan teknik kejuruteraan genetik. Itu adalah perpustakaan cDNA dan perpustakaan Genom. Perbezaan utama antara cDNA dan perpustakaan Genom adalah perpustakaan cDNA mengandungi DNA pelengkap klon dari mRNA total organisma sementara perpustakaan DNA genom mengandungi serpihan klon dari seluruh genom organisma. Perpustakaan DNA genom lebih besar daripada pustaka cDNA.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Perpustakaan cDNA
3. Apa itu Perpustakaan Genomik
4. Perbandingan Berdampingan - Perpustakaan cDNA vs Genomik
5. Ringkasan
Apakah Perpustakaan Genomik?
Perpustakaan DNA genom adalah kumpulan klon yang mengandungi serpihan DNA genom total organisma. Ia mengandungi keseluruhan DNA genom organisma itu, termasuk urutan pengekodan dan bukan pengekodan. Pembinaan perpustakaan genom dilakukan oleh teknologi DNA rekombinan diikuti dengan pengklonan (kejuruteraan genetik). Terdapat pelbagai langkah yang terlibat dalam pembinaan seperti yang ditunjukkan pada gambar 01. Prosesnya dimulakan dengan pengasingan DNA genom. Dengan menggunakan protokol pengekstrakan DNA yang sesuai, jumlah DNA genom organisma harus diasingkan. Kemudian DNA harus ditukar menjadi ukuran yang dapat dikendalikan atau menjadi serpihan tertentu dengan endonuklease sekatan (enzim pemotong DNA). DNA berpecah harus dimasukkan ke dalam vektor menggunakan ligase DNA (DNA bergabung dengan enzim). Vektor adalah organisma yang mereplikasi diri. Plasmid dan bakteriofag adalah vektor yang biasa digunakan dalam teknologi DNA rekombinan. Vektor-vektor ligasi ini dikenali sebagai molekul DNA rekombinan kerana mereka membawa urutan DNA sendiri dan yang dimasukkan. Vektor rekombinan ditambahkan ke bakteria inang dan dibuat untuk mengambil vektor rekombinan di dalam sel bakteria. Bakteria dengan vektor rekombinan (plasmid) harus ditanam dalam medium kultur. Semasa pendaraban bakteria, DNA bakteria, bersama dengan plasmid rekombinan, mereplikasi genomnya dan menghasilkan klon. Klon ini mengandungi seluruh genom organisma sumber. Oleh itu, ia dipanggil perpustakaan genom. Plasmid dapat dipisahkan dengan mudah dari DNA kromosom bakteria untuk membina perpustakaan genom organisma tersebut. Sekiranya organisma tertentu mengandungi gen yang berminat,mudah untuk mengesannya di perpustakaan genom dengan hibridisasi menggunakan probe molekul (penanda).
Perpustakaan genom adalah penting untuk mengkaji struktur dan fungsi genom, gen tertentu, lokasi gen, pemetaan gen, mutasi, penjujukan gen, pengenalpastian gen terapi baru dll.
Gambar_1: Pembinaan perpustakaan genom
Apakah perpustakaan cDNA?
Perpustakaan cDNA adalah kumpulan klon DNA pelengkap (cDNA) yang disintesis dari mRNA total organisma. Prosedur pembinaan melibatkan pelbagai langkah. Pemurnian total mRNA dari organisma adalah langkah pertama yang terlibat. MRNA terpencil diubah menjadi helai cDNA dengan proses yang disebut transkripsi terbalik. Transkripsi terbalik difasilitasi oleh enzim yang disebut transkripase terbalik. Ia menggunakan primer 3 'kecil dan memulakan sintesis untaian cDNA pertama yang melengkapkan dengan helai templat mRNA. Hasil cDNA untai ganda diubah menjadi serpihan yang lebih kecil menggunakan endonuklease sekatan dan dimasukkan ke dalam vektor yang sesuai. Molekul rekombinan yang dibina kemudian ditambahkan ke dalam organisma inang dan ditanam dalam medium kultur untuk menghasilkan klon. Pengumpulan klon yang mengandungi serpihan cDNA organisma dikenali sebagai perpustakaan cDNA. MRNA matang yang dihiris sepenuhnya tidak mengandungi intron dan kawasan peraturan. Oleh itu fragmen bukan pengekodan tidak terdapat di perpustakaan cDNA tidak seperti di perpustakaan genom.
Perpustakaan cDNA penting untuk analisis kawasan pengekodan, fungsi gen, ekspresi gen dll.
Gambar_2: Pembinaan perpustakaan cDNA
Apakah perbezaan antara cDNA dan Genomic Library?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
cDNA vs Perpustakaan Genomik |
|
| Perpustakaan cDNA adalah kumpulan klon yang mengandungi DNA pelengkap kepada mRNA organisma | Perpustakaan genom adalah kumpulan klon yang mengandungi jumlah DNA genom organisma. |
| Urutan Pengekodan dan Bukan Pengekodan | |
| Perpustakaan cDNA hanya mengandungi urutan pengekodan; ia tidak mengandungi intron. | Perpustakaan genom terdiri daripada keseluruhan DNA genomik termasuk DNA bukan kod (intron dan peraturan). |
| Saiz | |
| Perpustakaan cDNA kecil. | Perpustakaan genom adalah besar. |
| Bahan Permulaan | |
| Bahan permulaan adalah mRNA | Bahan permulaan adalah DNA. |
| Penglibatan Transkripsi Berbalik. | |
| Transkripsi terbalik berlaku dalam sintesis helai cDNA pertama. | Transkripsi terbalik tidak berlaku. |
Ringkasan - cDNA dan Genomic Library
Perpustakaan genom mewakili populasi klon yang mempunyai DNA genomik terpecah daripada organisma. Perpustakaan cDNA mewakili populasi klon yang mempunyai DNA pelengkap dari jumlah mRNA organisma. Klon cDNA hanya mengandungi urutan yang terdapat dalam mRNA sementara klon genom mengandungi urutan keseluruhan genom. Ini adalah perbezaan antara cDNA dan perpustakaan genom.
