Perbezaan Utama - Pengklonan vs Pengklonan
Pengklonan dan Subklon adalah prosedur biologi molekul yang membuat sel atau organisma yang serupa secara genetik dengan DNA atau gen yang menarik. Pengklonan adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen atau DNA yang berminat ke dalam vektor, replikasi di dalam bakteria inang, dan pengeluaran sel atau organisma yang merupakan salinan tepat dari susunan genetik. Subcloning adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen minat, yang sudah dimasukkan ke dalam vektor, ke vektor sekunder, replikasi di dalam bakteria inang, dan pengeluaran salinan gen atau sel yang sama secara genetik. Perbezaan utama antara pengklonan dan subklon adalah bahawa, dalam pengklonan, gen minat, setelah dihubungkan menjadi vektor, meneruskan proses pengklonan sementara, dalam subklon,gen minat yang sudah diklon dipisahkan dari vektor induk dan dimasukkan semula ke dalam vektor penerima dan meneruskan prosesnya.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Pengklonan
3. Apa itu Pengklonan
4. Perbandingan Berdampingan - Pengklonan vs Pengklonan
5. Ringkasan
Apa itu Pengklonan?
Pengklonan adalah prosedur yang menghasilkan organisma atau sel yang serupa secara genetik. Secara semula jadi, pengklonan berlaku dengan cara pembiakan aseksual. Apabila tidak ada penggabungan semula genetik atau perubahan, sel anak perempuan mendapat susunan genetik yang sama dari ibu bapa. Organisme prokariotik dan eukariotik membuat klon dengan pembelahan binari, pemula, mitosis, dll. Dalam biologi molekul, gen pengklonan atau serpihan DNA tertentu adalah kaedah yang popular untuk mengkaji struktur dan fungsi bahagian DNA tertentu.
Objektif utama pengklonan molekul adalah untuk membuat berjuta-juta salinan sel atau organisma yang genetik identik dengan serpihan DNA yang menarik (terutamanya gen). Ia mencipta organisma dengan salinan genetik yang tepat. Terutamanya, gen tertentu diklon dalam kajian molekul untuk mendapatkan maklumat struktur dan fungsional dan untuk penjujukan DNA. Juga, untuk pengeluaran protein atau produk tertentu dalam skala besar, pengklonan digunakan secara meluas.
Prosedur Pengklonan
Langkah-langkah asas prosedur pengklonan adalah seperti berikut.
- Pengenalpastian dan pengasingan gen yang diminati. (Pengukuhan gen minat dengan PCR).
- Sekatan pencernaan Gen yang diminati (Sekatan endonuclease memotong gen).
- Sekatan pencernaan DNA vektor. (DNA vektor juga dipotong menggunakan endonuclease sekatan yang sama).
- Memasukkan gen ke dalam vektor dan pembentukan molekul rekombinan.
- Transformasi vektor rekombinan menjadi bakteria inang.
- Pengasingan dan pengenalpastian bakteria yang diubah (vektor plasmid harus mengandungi gen yang dapat dipilih, biasanya gen ketahanan antibiotik untuk menyaring bakteria yang diubah).
- Ekspresi gen rekombinan dalam host.
Gambar_01: Prosedur Pengklonan
Apa itu Subcloning?
Subklon adalah prosedur memindahkan gen yang diminati dari satu vektor ke vektor yang lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan fungsi gen yang diinginkan. Dalam kaedah ini, dua vektor terlibat; iaitu, vektor induk dan vektor destinasi. Sisipan kloning dipindahkan lagi menjadi vektor kedua dalam subklon. Objektif pemindahan gen dari vektor pertama ke vektor kedua adalah untuk mendapatkan sesuatu yang tidak dapat dilakukan oleh vektor pertama atau memisahkan gen lagi dalam serpihan DNA yang sudah diklon dan menyatakannya sendiri. Enzim sekatan digunakan dalam prosedur ini pada awalnya.
Prosedur Subcloning
Langkah-langkah asas subcloning adalah seperti berikut.
- Dengan bantuan endonuklease sekatan, pemisahan DNA yang berminat dalam plasmid penderma (vektor induk).
- Pengukuhan DNA minat menggunakan PCR.
- Pemurnian produk PCR (DNA yang diminati) dengan elektroforesis gel.
- Pembukaan plasmid penerima dengan endonuklease sekatan yang sama yang digunakan untuk memisahkan DNA yang berminat dalam plasmid induk.
- Penggabungan DNA minat (gen) ke dalam plasmid penerima untuk membuat plasmid subklon.
- Transformasi vektor subklon menjadi bakteria inang yang kompeten.
- Pemeriksaan sel yang diubah.
- Pemurnian DNA plasmid dan penggunaan untuk penjujukan DNA atau ekspresi gen untuk mendapatkan produk yang diinginkan.
Subklon dilakukan pada kesempatan mengasingkan satu gen dari kumpulan gen yang diklon atau apabila gen yang diminati diperlukan untuk dipindahkan ke dalam plasmid yang berguna untuk melihat fungsi gen yang tepat.
Rajah_02: Prosedur Subcloning
Apakah perbezaan antara Kloning dan Subklon?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
Pengklonan vs Pengklonan |
|
| Pengklonan adalah prosedur yang menghasilkan organisma atau sel yang serupa secara genetik. | Subklon adalah prosedur memindahkan gen yang diminati dari satu vektor ke vektor yang lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan fungsi gen yang diinginkan. |
| Proses | |
| Pisahkan DNA yang menarik dari organisma dan masukkan ke dalam vektor sekali dan diklon | DNA yang sudah diklon dipisahkan dari vektor pertama dan dimasukkan ke dalam vektor kedua dan diklon. |
| Masukkan Pergerakan melalui Vektor | |
| Tidak memindahkan sisipan (DNA yang menarik) dari satu vektor ke vektor yang lain. | Pindahkan sisipan dari vektor induk ke vektor tujuan. |
Ringkasan - Pengklonan vs Pengklonan
Pengklonan menghasilkan sel atau organisma yang serupa secara genetik dengan gen atau DNA yang dimasukkan. Ia berlaku melalui pemisahan dan penyisipan DNA yang menarik ke dalam vektor dan ekspresi dalam bakteria inang. Subcloning berkongsi langkah yang serupa dengan pengklonan. Namun, dalam subklon, fragmen DNA yang sudah diklon (gen yang diminati) dimasukkan ke dalam vektor dan diubah menjadi bakteria inang. Itulah perbezaan utama antara pengklonan dan subklon.
