Perbezaan Utama - ELISA Langsung vs Tidak Langsung
Immunoassay yang berkaitan dengan enzim (ELISA), juga dikenal sebagai enzim immunoassay, adalah ujian serologi yang mengesan antibodi dalam darah. Ia digunakan sebagai alat diagnostik untuk mengetahui apakah pesakit telah terkena jenis virus tertentu atau agen berjangkit (antigen) lain dan apakah tubuh telah menghasilkan antibodi terhadap jangkitan tersebut. ELISA juga dapat mengenal pasti jangkitan masa lalu dan semasa. Oleh itu, ELISA sering digunakan sebagai ujian pra-pemeriksaan oleh doktor sebelum melakukan analisis penyakit secara mendalam. Ujian ini dapat dilakukan di makmal dengan mengambil sampel darah dari pesakit. Terdapat dua jenis ujian ELISA: ELISA langsung dan ELISA tidak langsung. Perbezaan utama antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah ELISA tidak langsung lebih sensitif dan memerlukan penambahan antibodi sekunder sementara ELISA langsung kurang sensitif dan hanya menggunakan antibodi primer.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu ELISA Langsung
3. Apa itu ELISA Tidak Langsung
4. Perbandingan Berdampingan - ELISA Langsung vs Tidak Langsung
5. Ringkasan
Apa itu ELISA Langsung?
ELISA adalah ujian diagnostik penyakit yang dilakukan untuk mengenal pasti kehadiran antigen atau antibodi tertentu dalam darah. Ia dilakukan sebagai pengujian plat. Ia menggunakan antibodi yang dihubungkan dengan enzim yang mudah diuji. Kehadiran antigen dalam sampel serum mengikat dengan antibodi spesifik yang dihubungkan dengan enzim. Pada langkah terakhir, substrat tertentu ditambahkan untuk bertindak balas dengan enzim. Enzim menukar substrat menjadi produk berwarna atau menghasilkan isyarat. Perubahan warna pada substrat kimia menunjukkan adanya antibodi tertentu dalam sampel serum. Ujian ELISA langsung hanya menggunakan antibodi utama yang dihubungkan dengan enzim. Setelah mengikat antigen, cepat berubah warna, menunjukkan adanya agen berjangkit di dalam darah. Walau bagaimanapun,intensiti isyarat lebih lemah pada ELISA langsung kerana epitop terhad kepada pengikatan antigen. Oleh itu, ELISA langsung kurang sensitif berbanding ELISA tidak langsung.
Gambar 01: Ujian ELISA Langsung
Apa itu ELISA Tidak Langsung?
ELISA dapat dilakukan dengan menggunakan dua jenis antibodi iaitu; antibodi primer dan antibodi sekunder. Alat ELISA tidak langsung menggunakan kedua-dua jenis antibodi untuk menguatkan isyarat untuk pengesanan yang lebih baik. Teknik ELISA tidak langsung dilakukan seperti berikut.
- Plat diinkubasi dengan antigen dan dicuci untuk menyekat pengikatan bukan spesifik.
- Kemudian antibodi primer ditambahkan dan dibasuh.
- Antibodi sekunder yang berkaitan dengan enzim ditambah dan dicuci.
- Substrat ditambahkan dan dibiarkan bertindak balas dengan enzim.
- Isyarat dikesan, dan kehadiran atau ketiadaan antigen spesifik dalam sampel dikenal pasti.
Dalam ujian ELISA tidak langsung, beberapa antibodi sekunder dapat mengikat satu antibodi primer. Antibodi sekunder dihubungkan dengan enzim yang mudah diuji. Oleh itu, satu pengikatan dapat memberikan isyarat yang kuat kerana lebih dari satu interaksi. Oleh itu, ELISA tidak langsung lebih sensitif daripada ELISA langsung. Walau bagaimanapun, ELISA tidak langsung dapat membuat isyarat tidak spesifik kerana tindak balas silang antibodi sekunder.
Gambar 02: Ujian ELISA Tidak Langsung
Apakah perbezaan antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
ELISA langsung vs tidak langsung |
|
| ELISA langsung kurang sensitif berbanding ELISA tidak langsung. | ELISA tidak langsung lebih sensitif. |
| Masa yang diambil | |
| Ujian ELISA langsung adalah proses yang cepat. | ELISA tidak langsung memakan masa. |
| Penggunaan Antibodi | |
| Hanya satu jenis antibodi (Antibodi primer) yang digunakan dalam ELISA langsung. | Antibodi primer dan sekunder digunakan untuk ELISA tidak langsung. |
| Paut dengan Enzim | |
| Antibodi primer dihubungkan dengan enzim. | Antibodi sekunder dihubungkan dengan enzim. |
| Kereaktifan silang Antibodi Kedua | |
| ELISA langsung menghilangkan kereaktifan silang antibodi kedua. | ELISA tidak langsung terjejas dengan kereaktifan silang antibodi kedua. |
| Isyarat | |
| Isyarat lemah berbanding ELISA tidak langsung. | Isyarat dikuatkan dalam ELISA tidak langsung. Oleh itu, ia mudah dikesan. |
Ringkasan - ELISA Langsung vs Tidak Langsung
ELISA adalah teknik biokimia yang digunakan terutamanya dalam imunologi untuk mengesan kehadiran antibodi atau antigen dalam sampel darah pesakit. Ia boleh dilakukan melalui dua proses yang dikenali sebagai ELISA langsung atau tidak langsung. Ujian ELISA langsung hanya menggunakan antibodi primer untuk mengesan antigen manakala ELISA tidak langsung menggunakan antibodi primer dan sekunder. Dalam ELISA langsung, antibodi primer diberi label sedangkan antibodi sekunder ELISA tidak langsung dilabel. Inilah perbezaan antara ELISA langsung dan tidak langsung.
