Perbezaan Utama - T4 vs T7 DNA Ligase
DNA ligase adalah enzim penting yang digunakan dalam teknik biologi molekul. Ia berfungsi sebagai gam molekul untuk bergabung dengan nukleotida dengan membentuk ikatan fosfodiester antara nukleotida. Ikatan fosfodiester terbentuk antara hujung hidroksil 3 'bahagian gula dan kumpulan fosfat akhir 5'. DNA ligase sangat penting dalam proses replikasi untuk bergabung dengan serpihan Okazaki dari helai yang tertinggal dan semasa mekanisme pembaikan DNA dan eksperimen pengklonan in vitro untuk bergabung dengan gen yang diinginkan dengan genom vektor. Terdapat dua ligase DNA utama yang digunakan pada masa ini oleh ahli biologi molekul: ligase DNA T4 dan T7. T4 DNA ligase adalah salah satu enzim pertama yang diasingkan dari bakteriofag T4. T7 DNA ligase, yang merupakan protein yang lebih kecil, adalah enzim yang diasingkan dari bakteriofag T7. Ini adalah perbezaan utama antara ligase DNA T4 dan T7.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah Tindakan DNA Ligase
3. Apakah itu T4 DNA Ligase
4. Apa itu T7 DNA Ligase
4. Persamaan Antara T4 dan T7 DNA Ligase
5. Perbandingan Berdampingan - T4 vs T7 DNA Ligase dalam Jadual Tingkatan
6. Ringkasan
Apakah Tindakan DNA Ligase?
Ligasi DNA berlaku dalam tindak balas tiga langkah. Langkah pertama adalah serangan nukleofilik pada alpha-fosfor ATP yang menghasilkan perantaraan enzim-adenylate kovalen di mana AMP dihubungkan dengan nitrogen rantai sisi terminal lisin. Pada langkah kedua, serangan nukleofilik berlaku pada fosfor enzim-adenilat oleh substrat DNA 5'-fosfat, melepaskan lisin dan membentuk DNA-adenilat. Pada langkah terakhir, DNA-adenylate diserang oleh 3'- OH untaian DNA lain, melepaskan AMP dan bergabung dengan polinukleotida.
Apa itu T4 DNA Ligase?
T4 Ligase adalah ligase pertama yang diasingkan dan dikenal pasti oleh Meselson, Weigle, dan Kellenberger dan merupakan ligase komersial pertama yang dihasilkan. T4 DNA ligase adalah enzim bergantung ATP yang memangkinkan pembentukan ikatan fosfodiester. Ia adalah rantai polipeptida tunggal dengan 487 residu asid amino dan mempunyai berat molekul sekitar 77 kDa. PH optimum untuk aktivitinya terletak pada julat 7.5 - 8.
Gambar 01: T4 DNA Ligase
T4 DNA Ligase, seperti namanya, terdapat dalam bakteriofag T4 dan diasingkan ketika fag menghasilkan enzim setelah dijangkiti E. coli. Enzim ini mengikat dupleks DNA untai berganda dengan hujung yang tumpul dan serpihan yang hendak diikat harus berdekatan satu sama lain.
Apa itu T7 DNA Ligase?
T7 ligase adalah protein 41 kDa yang dihasilkan oleh T7 Bacteriophage dan diasingkan dengan menjangkiti sel E. coli. Fungsi utama T7 ligase adalah untuk mengikat dupleks DNA melalui hubungan fosfodiester dan bergabung dengan serpihan DNA yang berdekatan semasa eksperimen pengklonan. PH optimum untuk ligase DNA T7 terletak pada julat 7.0 - 7.2. T7 ligase bergantung kepada ATP. Ligase DNA T7 juga mampu menganalisis hibrida DNA dan RNA, sehingga menimbulkan penyimpangan yang tidak normal semasa transkripsi; namun, fenomena ini masih dalam kajian oleh kajian in vitro.
Apakah Persamaan Antara T4 dan T7 DNA Ligase?
- T4 dan T7 DNA Ligase mengambil bahagian dalam tindak balas ligasi dengan menyepuhlindakan dupleks DNA melalui pembentukan ikatan fosfodiester antara hujung 3 'OH dan hujung fosfat 5' serpihan DNA.
- Kedua-dua enzim ini mengikat dupleks DNA yang tumpul dan hampir saling berdekatan.
- Kedua-dua enzim bergantung kepada ATP.
- Enzim ini diasingkan dengan menjangkiti sel E. coli dengan bakteriofag tertentu.
-
Aplikasi kedua-dua enzim termasuk:
- Pengklonan molekul - untuk menghubungkan gen yang berminat dengan vektor
- Pembaikan DNA - untuk memperbaiki ceruk untai berkembar
- Replikasi DNA in vitro
- Tindak balas rantai ligase
Apakah Perbezaan Antara T4 dan T7 DNA Ligase?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
T4 vs T7 DNA Ligase |
|
| T4 DNA Ligase Jenis ligase DNA yang diasingkan dari bakteriofag T4 dan terlibat dalam mengikat serpihan DNA bersebelahan melalui pembentukan ikatan fosfodiester. | T7 DNA Ligase jenis ligase DNA yang diasingkan dari bakteriofag T7 dan terlibat dalam mengikat serpihan DNA bersebelahan melalui pembentukan ikatan fosfodiester. |
| Saiz Protein | |
| Saiz ligase DNA T4 adalah 77 kDa - lebih besar berbanding dengan ligase DNA T7. | Saiz ligase DNA T7 ialah 41 kDa. |
| PH optimum | |
| Julat pH yang berfungsi ligase DNA T4 adalah 7.5 - 8.0. | Julat pH yang berfungsi ligase DNA T7 adalah 7.0 - 7.2. |
Ringkasan - T4 vs T7 DNA Ligase
DNA ligase adalah kelas penting enzim yang terlibat dalam pengklonan molekul untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan yang mengandungi gen yang diminati. Reaksi ligasi adalah reaksi yang menggunakan tenaga dan ada kajian penyelidikan baru yang dilakukan untuk meningkatkan ketepatan dengan memodulasi ligase yang ada. Ligase DNA T4 dan T7 adalah dua jenis enzim DNA ligase penting yang digunakan dalam teknik biologi molekul. T7 DNA ligase juga merupakan hasil penyelidikan yang berdasarkan pada ligase primer yang diasingkan dari E. coli yang dijangkiti T4. T7 digambarkan lebih kecekapan dan ketepatan dalam menjalankan fungsinya kerana ukurannya yang lebih kecil. Ini adalah perbezaan antara T4 dan T7 ligase.
Muat turun Versi PDF T4 vs T7 DNA Ligase
Anda boleh memuat turun versi PDF artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan luar talian seperti dalam catatan petikan. Sila muat turun versi PDF di sini Perbezaan Antara T4 dan T7 Ligase.
