Perbezaan Utama - Pengekstrakan DNA vs RNA
Kajian DNA dan RNA adalah aspek penting untuk memahami konsep asas biologi molekul, bioteknologi, dan genetik. Pengambilan sampel DNA dan RNA tulen diperlukan untuk menjalankan prosedur eksperimen semasa kajian ini. Perbezaan utama antara pengekstrakan DNA dan RNA adalah bahawa proses pengekstrakan DNA membersihkan DNA sementara pengekstrakan RNA membersihkan RNA. Proses pengekstrakan DNA mempunyai tiga langkah yang berbeza: lisis sel dan katabolisme lipid membran dan protein, penggumpalan katabolit dengan larutan garam pekat dan pemendakan DNA dengan etanol. Prosedur tiga langkah boleh terdiri daripada dua langkah pilihan. Proses pemurnian RNA terdiri daripada empat langkah yang berbeza: penambahan guanidium thiosianat untuk lisis sel, denaturasi protein termasuk ribonuklease,pemisahan RNA dengan penambahan kloroform dan fenol dan pencucian endapan menggunakan etanol.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Pengekstrakan DNA
3. Apakah Pengekstrakan RNA
4. Persamaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA
5. Perbandingan Berdampingan - Ekstraksi DNA vs RNA dalam Bentuk Jadual
6. Ringkasan
Apa itu Pengekstrakan DNA?
Pengekstrakan DNA adalah proses fizikal dan kimia yang digunakan untuk membersihkan DNA dari sampel. Pengekstrakan DNA adalah aspek penting dalam konteks biologi molekul dan sains forensik. Prosesnya terdiri daripada tiga langkah asas. Pada mulanya, sel-sel minat mesti diperoleh. Selanjutnya, lisis sel difasilitasi untuk memecahkan membran sel, yang membuka sel dan mendedahkan sitoplasma bersama dengan DNA. Surfaktan atau deterjen lain dapat digunakan untuk mencairkan lipid dari membran sel sementara protein yang ada dikatabolisme oleh protease. Ini adalah langkah pilihan. Sebaik sahaja sel itu diproses, penggumpalan molekul yang dikatabolisme difasilitasi oleh larutan garam pekat. Ia diikuti dengan sentrifugasi larutan yang memisahkan gumpalan serpihan dari DNA. Pada peringkat ini,DNA yang dibezakan dicampurkan dengan reagen dan garam yang digunakan semasa kitaran sel.
Gambar 01: Pengekstrakan DNA
Untuk membersihkannya lebih jauh, langkah-langkah berikut dapat digunakan. Salah satu kaedahnya ialah pemendakan etanol, yang melibatkan pencampuran etanol sejuk dengan sampel DNA yang dipisahkan. DNA tidak larut dalam alkohol dan dengan itu menghasilkan pelet kerana pengumpulan molekul DNA bersama-sama. Natrium asetat ditambahkan dalam proses ini untuk meningkatkan tahap pemendakan dengan meningkatkan kekuatan ion. Sebagai tambahan kepada proses pemendakan etanol, proses pengekstrakan fenol-kloroform juga dapat dilakukan untuk ini. Dalam kaedah ini, fenol menafikan protein yang terdapat dalam sampel. Setelah disentrifugasi, protein yang didenaturasi akan kekal dalam fasa organik sementara molekul DNA yang dicampurkan dengan kloroform akan hadir dalam fasa berair. Kloroform akan menghilangkan sisa fenol. Setelah pengekstrakan selesai,DNA disimpan larut dalam buffer TE atau air ultra tulen.
Apa itu Pengekstrakan RNA?
Pemurnian RNA adalah proses di mana RNA disucikan dari sampel biologi. Oleh kerana kehadiran ribonuclease di dalam sel dan tisu, proses ini rumit. Enzim Ribonuclease mempunyai keupayaan untuk menurunkan RNA dengan cepat. Sifat kimia ribonuklease sangat stabil, dan sukar untuk mematikannya. Meneutralkan ribonuklease adalah pilihan. Oleh kerana enzim ini terdapat di sel dan tisu, teknik khas dikembangkan untuk pengekstrakan RNA. Daripada banyak kaedah, kaedah yang biasa digunakan adalah pengekstrakan Guanidinium thiocynate-phenol-chloroform.
Gambar 02: Pengekstrakan RNA
Kaedah pengekstrakan Guanidinium thiocynate-phenol-chloroform bergantung pada sentrifugasi dan pemisahan fasa. Campuran yang akan disentrifugasi terdiri daripada sampel berair dan larutan tepu air yang terdiri daripada fenol dan kloroform. Setelah disentrifugasi, larutan terdiri daripada fasa berair atas dan fasa organik yang lebih rendah dalam keadaan pH neutral (pH 7-8). RNA hadir dalam fasa berair. Fasa organik biasanya terdiri daripada protein yang dilarutkan dalam fenol dan lipid yang dilarutkan dalam kloroform. Ejen chaotropic (molekul yang mempunyai keupayaan untuk memutuskan ikatan hidrogen antara molekul air) ditambahkan; ini dikenali sebagai, guanidinium thiocyanate. Ejen ini mempunyai keupayaan untuk mendefinisikan protein yang merangkumi ribonuklease yang dapat menurunkan RNA dan terlibat dalam lisis sel. Ia juga memisahkan rRNA dari protein ribosom. Langkah terakhir pemurnian RNA adalah mencuci pemendapan fasa berair dengan etanol. RNA juga dapat dimurnikan menggunakan nitrogen cair.
Apakah Persamaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA?
- Kedua-dua proses pengekstrakan menggunakan bahan kimia berbahaya seperti fenol dan kloroform.
- Sentrifugasi adalah teknik penting untuk kedua-dua proses.
- Etanol digunakan untuk mencuci endapan dan untuk mendapatkan DNA atau RNA yang disucikan.
Apakah Perbezaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
Pengekstrakan DNA vs RNA |
|
| Pengekstrakan DNA adalah proses yang mengekstrak DNA dari organisma atau sampel. | Pengekstrakan RNA adalah proses yang mengeluarkan RNA dari sampel. |
| Langkah-langkah | |
| Proses pengekstrakan DNA terdiri daripada tiga langkah berbeza dengan dua langkah pilihan. | Proses pengekstrakan RNA terdiri daripada empat langkah yang berbeza. |
| Reagen | |
| Surfaktan, protease (pilihan), alkohol, kloroform, fenol, natrium asetat digunakan untuk pengambilan DNA. | Guanidium thiocyanate, chloroform, phenol, ethanol digunakan untuk pengambilan RNA. |
Ringkasan - Pengekstrakan DNA vs RNA
Pengekstrakan DNA dan RNA adalah aspek penting dalam prosedur eksperimen untuk kajian biologi molekul, genetik, dan bioteknologi. Kedua-dua proses tersebut melibatkan reagen yang serupa, tetapi pengekstrakan RNA menggunakan reagen khas yang dikenali sebagai Guanidium thiocyanate yang mengurangkan aktiviti ribonuklease. Ini adalah perbezaan utama antara pengekstrakan DNA dan RNA.
Muat turun Versi PDF DNA vs RNA Extraction
Anda boleh memuat turun versi PDF artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan luar talian seperti dalam catatan petikan. Sila muat turun versi PDF di sini Perbezaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA
