Perbezaan Utama - Percubaan Hangat vs Sejuk
Trypsinization Hangat dan Dingin adalah dua kaedah yang digunakan dalam pemisahan sel enzimatik dalam kultur sel haiwan. Perbezaan utama antara trypsinization panas dan sejuk, seperti namanya, bergantung pada suhu di mana trypsin ditambahkan untuk pemisahan sel. Trypsinization hangat berlaku dalam keadaan suhu yang lebih tinggi (36.5 - 37 0 C) sedangkan trypsinization sejuk berlaku dalam keadaan suhu rendah.
Semasa proses pengkulturan sel primer sel haiwan, ada tiga kaedah utama yang digunakan dan terbukti berjaya. Ketiga kaedah tersebut merangkumi pemisahan sel mekanikal, pemisahan sel enzimatik dan teknik eksplan primer. Pemisahan sel enzimatik membawa kepada pengasingan sel dan ia dilakukan oleh enzim penghancur protein trypsin. Oleh itu, proses ini dikenali sebagai Trypsinization. Percubaan boleh dilakukan di bawah dua keadaan yang berbeza iaitu Trypsinization Warm dan Cold Trypsinization. Trypsinization hangat adalah kaedah merawat sel dengan trypsin dalam keadaan suam pada suhu 36.5 - 37 0C. Trypsinization sejuk adalah proses rawatan trypsin yang berlaku dalam keadaan yang lebih sejuk di dalam ais yang mengekalkan suhu yang sangat rendah.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Trypsinization Hangat
3. Apa itu Trypsinization Sejuk
4. Persamaan Antara Trypsinization Hangat dan Dingin
5. Perbandingan Berdampingan - Trypsinization Hangat vs Dingin dalam Bentuk Jadual
6. Ringkasan
Apa itu Trypsinization Hangat?
Percubaan boleh dilakukan untuk memisahkan komponen sel agar dapat mengasingkan sel untuk menghasilkan kultur sel primer. Trypsin adalah enzim degradasi protein, dan campuran enzim yang digunakan dalam trypsinization boleh menjadi ekstrak kasar atau produk yang disucikan. Ekstrak kasar dikatakan lebih cekap dalam lisis protein dan pembelahan sel kerana mengandungi enzim degradatif lain.
Trypsinization hangat adalah kaedah enzimatik yang paling biasa digunakan untuk pemisahan sel yang berlaku dalam keadaan suhu yang lebih tinggi. Sebelum rawatan dengan trypsinization, tisu yang dikehendaki dicincang menjadi kepingan yang lebih kecil. Ini memudahkan proses pengasingan yang mudah. Tisu yang dicincang kemudian dicuci dalam media khas yang dikenali sebagai medium Garam Basal Dissection.
Setelah selesai langkah mencuci, sel-sel diubah menjadi termos yang mengandungi enzim aktif, iaitu trypsin. Oleh kerana teknik ini menunjukkan protokol trypsinization hangat, trypsin diletakkan pada suhu sekitar 37 0 C selama kira-kira empat jam.
Gambar 01: Trypsin
Kandungannya dicampur dan diaduk dengan menggunakan kaedah sentrifugasi untuk kemudahan protokol dan mempercepat proses pemisahan. Setelah masa yang disyorkan dicapai, sel-sel dapat diambil dari supernatan. Sel yang berasal dari supernatan kemudian diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu.
Apa itu Trypsinization Sejuk?
Trypsinization sejuk adalah jenis trypsinization lain yang berlaku dalam keadaan sejuk. Dalam teknik ini, sel yang dicincang dan dicuci diletakkan di dalam botol di atas ais dan kemudian direndam dengan trypsin. Tempoh rendaman jauh lebih lama - sekitar 6 - 24 jam.
Setelah selesai prosedur rendaman, trypsin dikeluarkan dari lisat sel, dan kepingan tisu diinkubasi seterusnya pada suhu 37 0 C selama kira-kira 20 - 30 minit. Pemisahan sel-sel disebabkan oleh pipetting berulang tisu campuran. Ini akan membolehkan sel-sel melepaskan diri dari membran dan datang ke supernatan. Setelah sel-sel berada di dalam supernatan, mereka diinkubasi dan tumbuh pada suhu dan jangka masa yang diinginkan.
Kaedah trypsinization sejuk mempunyai beberapa kelebihan
- Hasil sel yang lebih tinggi kerana kerosakan sel diminimumkan. Kerosakan sel dapat diminimumkan dengan tidak menggunakan langkah-langkah sentrifugasi.
- Kaedah yang sangat mudah.
- Kurang rajin.
Batasan utama kaedah trypsinization sejuk adalah bahawa jumlah besar tidak dapat digunakan dalam satu kejadian.
Apakah Persamaan Antara Percubaan Hangat dan Sejuk?
- Kedua-dua proses Trypsinization Hangat dan Dingin menggunakan enzim trypsin untuk pemisahan sel.
- Kedua-dua proses Trypsinization Hangat dan Dingin digunakan dalam prosedur kultur sel untuk pemisahan sel.
- Dalam kedua-dua prosedur rawatan Trypsinization Hangat dan Dingin, sel-sel berasal dari supernatan.
Apakah Perbezaan Antara Percubaan Hangat dan Sejuk?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
Percubaan Hangat vs Sejuk |
|
| Trypsinization hangat adalah kaedah merawat sel dengan trypsin dalam keadaan suam pada suhu 36.5 - 37 0. | Trypsinization sejuk adalah proses rawatan trypsin yang berlaku dalam keadaan yang lebih sejuk di dalam ais yang mengekalkan suhu yang sangat rendah. |
| Protokol | |
| Potongan tisu yang dicincang disimpan pada suhu 37 0 C secara berterusan sepanjang prosedur. | Potongan tisu yang dicincang pada mulanya dikekalkan pada suhu sejuk-sejuk dan kemudian dikekalkan pada suhu 37 0. |
| Suhu | |
| Trypsinization hangat berlaku pada 36.5 - 37 0 | Trypsinization sejuk berlaku pada suhu sejuk. |
| Masa Dimakan | |
| Lebih sedikit masa yang diperlukan untuk keseluruhan proses (sekitar 4 jam) trypsinization hangat. | Masa yang lebih lama diperlukan (sekitar 6 - 24 jam) untuk trypsinization sejuk. |
| Hasil Sel yang Berubah | |
| Rendah dalam trypsinization. | Tinggi dalam trypsinization sejuk. |
| Penggunaan Sentrifugasi | |
| Sentrifugasi diperlukan untuk pemisahan sel dalam trypsinization hangat. | Sentrifugasi tidak diperlukan dalam trypsinization sejuk. |
| Kuantiti Tisu Permulaan untuk Pencubaan | |
| Sebilangan besar tisu boleh digunakan dalam trypsinization hangat. | Sebilangan kecil tisu boleh digunakan dalam trypsinization sejuk. |
| Kerosakan Sel | |
| Tinggi kerana sentrifugasi pada trypsinization hangat. | Kurang kerana trypsinization sejuk. |
Ringkasan - Percubaan hangat dan sejuk
Trypsinization adalah kaedah menggunakan enzim pengurai protein trypsin untuk pemisahan dan penyediaan kultur sel primer semasa proses kultur sel. Terdapat dua teknik utama trypsinization berdasarkan suhu yang digunakan semasa prosedur. Mereka adalah trypsinization yang hangat dan sejuk. Trypsinization hangat dilakukan pada suhu 37 0 C sedangkan trypsinization sejuk dilakukan dalam keadaan sejuk-sejuk. Walaupun trypsinization sejuk memerlukan masa yang lebih lama untuk disiapkan, ia dikatakan mempunyai hasil sel yang lebih tinggi. Ini disebabkan oleh fakta bahawa kerosakan sel diminimumkan dalam trypsinization sejuk kerana tidak menggunakan langkah-langkah sentrifugasi yang kuat. Ini adalah perbezaan antara trypsinization panas dan sejuk.
