Perbezaan Utama - Terjemahan Nick vs Sambungan Primer
Terjemahan Nick dan peluasan primer adalah dua teknik penting yang dilakukan dalam biologi Molekul. Perbezaan utama antara terjemahan nick dan peluasan primer adalah bahawa proses terjemahan nick menghasilkan probe berlabel untuk teknik hibridisasi lain sementara kaedah peluasan primer mengenal pasti urutan RNA tertentu dari campuran dan mendedahkan maklumat mengenai ekspresi mRNA. Kedua-dua teknik ini sangat penting dan dilakukan secara rutin di makmal penyelidikan molekul.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Terjemahan Nick
3. Apa itu Sambungan Primer
4. Perbandingan Berdampingan - Terjemahan Nick vs Sambungan Primer
5. Ringkasan
Apa itu Terjemahan Nick?
Terjemahan Nick adalah teknik penting yang digunakan untuk menyediakan probe berlabel untuk pelbagai teknik biologi molekul seperti blotting, hibridisasi in situ, hibridisasi in situ pendarfluor dll. Ia adalah kaedah in vitro pelabelan DNA. Pemeriksaan DNA digunakan untuk mengenal pasti urutan DNA atau RNA tertentu. Dengan bantuan probe berlabel, serpihan tertentu dapat ditandakan atau dilihat dari campuran kompleks asid nukleik. Oleh itu, probe berlabel disediakan dengan menggunakan pelbagai teknik yang akan digunakan untuk teknik yang berbeza. Terjemahan Nick adalah salah satu kaedah yang menghasilkan probe berlabel dengan bantuan enzim DNase 1 dan DNA polimerase 1.
Proses terjemahan nick dimulakan dengan aktiviti enzim DNase 1. DNase 1 memperkenalkan nicks di tulang belakang fosfat DNA untai ganda dengan memutuskan ikatan fosfodiester antara nukleotida. Sebaik sahaja nama samaran dibuat bebas, kumpulan 3 'OH nukleotida akan dihasilkan dan enzim DNA polimerase 1 akan bertindak ke atasnya. Aktiviti exonuclease 5 'hingga 3' DNA polimerase 1 menghilangkan nukleotida dari nick ke arah 3 'untai DNA. Pada masa yang sama, aktiviti polimerase enzim DNA polimerase 1 berfungsi dan menambahkan nukleotida untuk menggantikan nukleotida yang dikeluarkan. Sekiranya nukleotida dilabel, penggantian akan berlaku oleh nukleotida berlabel dan ia akan menandakan DNA untuk dikenal pasti. DNA berlabel yang baru disintesis ini dapat digunakan sebagai probe dalam pelbagai reaksi hibridisasi dalam Biologi Molekul.
Gambar 01: Proses terjemahan Nick
Apakah Sambungan Primer?
Sambungan primer adalah teknik yang digunakan untuk mencari urutan RNA spesifik dari campuran RNA dan mencari hujung transkrip mRNA 5 '. Ia juga digunakan untuk mengkaji struktur RNA dan ekspresi. Kaedah peluasan primer dijalankan dengan primer berlabel atau dengan nukleotida berlabel. Sekiranya primer berlabel digunakan, tidak termasuk keperluan pelabelan nukleotida yang digunakan untuk sintesis cDNA. Terdapat beberapa langkah dalam teknik ini. Ia dimulakan dengan pengambilan RNA dari sampel. Kemudian primer oligonukleotida berlabel ditambahkan ke dalam campuran bersama-sama dengan bahan yang diperlukan untuk mensintesis cDNA dari urutan RNA tertentu. Primer anil dengan urutan pelengkap dari campuran. Menggunakan urutan anil primer sebagai templat,enzim transkripase terbalik mensintesis DNA pelengkap (cDNA) dari urutan RNA. Anil primer dan transkripsi terbalik hanya berlaku apabila urutan RNA spesifik terdapat dalam sampel. Akhirnya, apabila elektroforesis gel denaturasi dilakukan, ukuran urutan RNA dapat ditentukan. Juga mudah untuk mencari asas +1 urutan mRNA (tapak permulaan transkripsi) dengan kaedah peluasan primer. Jumlah mRNA yang terdapat dalam sampel dapat diukur dengan kaedah ini jika lebihan primer digunakan. Juga mudah untuk mencari asas +1 urutan mRNA (tapak permulaan transkripsi) dengan kaedah peluasan primer. Jumlah mRNA yang terdapat dalam sampel dapat diukur dengan kaedah ini jika lebihan primer digunakan. Juga mudah untuk mencari asas +1 urutan mRNA (tapak permulaan transkripsi) dengan kaedah peluasan primer. Jumlah mRNA yang terdapat dalam sampel dapat diukur dengan kaedah ini jika lebihan primer digunakan.
Gambar 02: Sambungan primer
Apakah perbezaan antara Terjemahan Nick dan Ekstensi Primer?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
Terjemahan Nick vs Sambungan Primer |
|
| Terjemahan Nick adalah proses yang membuat probe DNA berlabel untuk pelbagai reaksi hibridisasi. | Penyambungan primer adalah teknik yang digunakan untuk mencari RNA tertentu atau untuk mengkaji ekspresi gen. |
| Enzim Digunakan | |
| Enzim DNase 1 dan DNA polimerase digunakan. | Enzim transkripase terbalik digunakan. |
| Kepentingan | |
| Terjemahan Nick memudahkan penandaan urutan DNA tertentu. | Sambungan primer membolehkan pengesanan ukuran urutan mRNA tertentu dan jumlah yang terdapat dalam sampel. |
Ringkasan - Terjemahan Nick vs Sambungan Primer
Terjemahan Nick adalah kaedah yang digunakan untuk mensintesis probe berlabel berdasarkan aktiviti enzim DNase 1 dan E coli DNA polimerase 1. Ini adalah kaedah in vitro yang digunakan di makmal sebelum teknik hibridisasi berbeza. Semasa terjemahan nick, aktiviti eksonukase 5'-3 'DNA polimerase 1 menghilangkan nukleotida lebih awal daripada aktiviti nick dan polimerase DNA polimerase 1 menggantikan nukleotida yang dikeluarkan dengan nukleotida berlabel di belakang nick. Sambungan primer adalah kaedah yang digunakan untuk mengesan transkrip RNA tertentu dari campuran dan mengukur ukuran dan jumlah RNA minat. Ini adalah perbezaan antara terjemahan nick dan peluasan primer.
