Perbezaan Utama - Kertas vs Lapisan Tipis vs Kromatografi Lajur
Kromatografi kertas, kromatografi lapisan tipis, dan kromatografi lajur adalah tiga jenis teknik kromatografi. Perbezaan utama antara kromatografi kertas, kromatografi lapisan nipis dan kromatografi lajur berdasarkan jenis fasa pegun yang digunakan dalam teknik kromatografi. Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegunnya, kromatografi Lapisan Tipis menggunakan alumina atau gel silika sebagai fasa pegunnya, sedangkan kromatografi Lajur menggunakan lajur yang dibungkus dengan bahan matriks yang sesuai sebagai fasa pegunnya.
Dalam proses pemisahan dan pengenalan biomolekul seperti protein dan karbohidrat, kromatografi adalah teknik biofizik penting yang digunakan. Kromatografi memisahkan sebatian berdasarkan kelarutan, saiz dan casnya. Berdasarkan mekanisme pemisahan, kromatografi menggunakan mekanisme seperti pertukaran ion, penyerapan, partisi dan pengecualian ukuran dan terdapat tiga teknik kromatografi; iaitu, kertas, lapisan nipis, dan kromatografi lajur. Kromatografi kertas berdasarkan penjerapan pepejal-cecair dan kelarutan sebatian, dan ia menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegun. Kromatografi lapisan nipis berdasarkan penjerapan molekul pepejal-cecair. Ia mempunyai fasa pegun yang biasanya terbuat dari alumina atau gel silika dan fasa bergerak yang merupakan pelarut. Kromatografi lajur menggunakan lajur yang dikemas dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutamanya berdasarkan ukuran, pertalian atau casnya.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan Kromatografi dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Kromatografi Kertas
3. Apa itu Kromatografi Lapisan Tipis
4. Apa itu Kromatografi Lajur
5. Persamaan Antara Kertas, Lapisan Tipis dan Kromatografi Lajur
6. Perbandingan Berdampingan - Kertas vs Lapisan Tipis vs Kromatografi Lajur dalam Bentuk Jadual
7. Ringkasan
Apa itu Kromatografi Kertas?
Kromatografi kertas adalah jenis kromatografi paling sederhana yang digunakan, dan ia tidak digunakan untuk penyelidikan yang luas. Ia digunakan terutamanya di makmal pelajar untuk mengenal pasti biomolekul seperti asid amino dan karbohidrat yang terdapat dalam campuran. Kromatografi kertas menggunakan fasa pegun yang dibuat menggunakan kertas selulosa atau kertas saringan Whatman dan fasa bergerak yang biasanya disiapkan menggunakan pelarut organik seperti n-butanol, dll. Fasa pegun tepu dengan air, menjadikan fasa pegun menjadi cair. Oleh itu, apabila sebatian tersebut dilihat dan dibiarkan berjalan di hadapan fasa bergerak, bergantung pada kelarutan sebatian tersebut, ia dipisahkan. Oleh itu, setelah pengembangan kromatogram, pewarnaan dapat dilakukan untuk menentukan jangka panjang setiap sebatian. Oleh itu, faktor pengekalan dapat dikira.
Gambar 01: Kromatografi Kertas
Kromatografi kertas dapat dikelaskan lebih lanjut sebagai kromatografi kertas menaik dan kromatografi kertas menurun bergantung pada arah pelarut yang sedang berjalan.
Apa itu Kromatografi Lapisan Tipis?
Kromatografi lapisan tipis atau TLC adalah teknik yang biasa digunakan untuk mengenal pasti asid amino yang berlainan yang terdapat dalam campuran atau untuk mengenal pasti protein. Teknik pemisahan berdasarkan penjerapan pepejal-cecair. Semasa kromatografi lapisan nipis, plat yang terbuat dari alumina atau gel silika digunakan sebagai fasa pegun. Campuran pelarut berbeza mengikut keperluan dan boleh menggunakan kombinasi sebatian organik yang berbeza seperti n-butanol, asid asetik, dan air untuk menyediakan pelarut. Sebatian yang hendak dipisahkan dicampurkan di atas pinggan dan direndam dalam campuran pelarut. Setelah pelarut bergerak naik berdasarkan tindakan kapilari yang diberikan oleh plat, sebatian yang dilihat pada plat juga bergerak bergantung pada kelarutannya dalam pelarut.
Gambar 02: Kromatografi Lapisan Tipis
Pengesanan bintik-bintik setelah kromatogram dijalankan dengan prosedur pewarnaan yang berbeza. Ada yang menggunakan pewarnaan ninhydrin yang merupakan kaedah pewarnaan beracun. Kromatogram lapisan nipis moden menggunakan teknik pendarfluor untuk melihat kromatogram selepas dijalankan. Bergantung pada jarak yang dilalui, masa pengekalan setiap kompaun dapat dikira. Ini boleh digunakan untuk mengenal pasti jenis sebatian yang dipisahkan berdasarkan campuran yang digunakan. TLC digunakan terutamanya untuk mengenal pasti asid amino dalam campuran protein dan juga untuk memisahkan pelbagai jenis monosakarida yang terdapat dalam campuran.
Apa itu Kromatografi Lajur?
Kromatografi lajur adalah istilah luas yang digunakan untuk menggambarkan banyak jenis teknik kromatografi yang menggunakan kaedah pemisahan berdasarkan lajur. Dalam kromatografi lajur, lajur fizikal digunakan dengan bahan pembungkus untuk memisahkan sebatian. Pemisahan mungkin berdasarkan sifat fizikal yang berbeza yang ditunjukkan oleh sebatian. Sifat-sifat ini boleh berupa cas, ukuran, konformasi 3D dan kapasiti pengikatan, dll. Oleh itu, lajur yang dibungkus dengan bahan matriks bertindak sebagai fasa pegun dan penyangga pencuci yang digunakan pada lajur bertindak sebagai fasa bergerak.
Sekiranya molekul-molekul dipisahkan berdasarkan ukurannya, bahan pembungkusannya dibungkus sedemikian rupa sehingga meninggalkan liang-liang agar sebatian tersebut dapat dilalui. Oleh itu, molekul yang lebih besar yang tidak dapat mengalir melalui liang dielusi terlebih dahulu, sedangkan molekul yang lebih kecil memerlukan masa yang lebih lama untuk dielusi.
Gambar 03: Kromatografi Lajur
Sekiranya molekul dipisahkan berdasarkan muatannya, fasa pegun akan mengandungi penukar anion atau kation yang mana sebatian akan tertarik berdasarkan muatannya. Oleh itu semasa proses mencuci, sebatian yang tidak terikat akan dielusi. Setelah menambahkan penyangga elusi, sebatian terikat yang terikat akan dielusi. Pengesanan eluen ini kebanyakannya berdasarkan teknik spektrofotometri.
Apakah Persamaan Antara Lapisan Tipis Kertas dan Kromatografi Lajur?
- Semua teknik Paper Thin Layer dan Column Chromatography digunakan untuk pemisahan biomolekul seperti asid amino, protein dan karbohidrat.
- Teknik Paper Thin Layer dan Column Chromatography mempunyai fasa bergerak dan fasa pegun.
- Teknik Lapisan Tipis Kertas dan Kromatografi Lajur menggunakan mekanisme biofizik untuk pemisahan.
Apakah Perbezaan Antara Lapisan Tipis Kertas dan Kromatografi Lajur?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
Kertas vs Lapisan Tipis vs Kromatografi Lajur |
|
| Kromatografi Kertas | Kromatografi kertas adalah teknik kromatografi yang digunakan untuk memisahkan sebatian berdasarkan penjerapan dan larutan cecair-cecair sebatian. Ia menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegunnya. |
| Kromatografi Lapisan Tipis | Kromatografi lapisan tipis adalah teknik kromatografi lain berdasarkan penjerapan molekul pepejal-cecair. Ia mempunyai fasa pegun yang terbuat dari alumina atau gel silika dan pelarut sebagai fasa bergerak, yang merupakan pelarut. |
| Kromatografi Lajur | Kromatografi lajur menggunakan lajur yang dikemas dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutamanya berdasarkan ukuran, pertalian atau casnya. |
| Fasa pegun | |
| Kromatografi Kertas | Kertas yang terbuat dari nitroselulosa Whatman digunakan sebagai fasa pegun dalam kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapisan Tipis | Alumina atau Silica gel digunakan sebagai fasa pegun kromatografi lapisan nipis. |
| Kromatografi Lajur | Lajur yang dibungkus dengan bahan pembungkus yang sesuai digunakan sebagai fasa pegun dalam kromatografi lajur. |
| Fasa Mudah Alih | |
| Kromatografi Kertas | Pelarut berjalan adalah fasa bergerak kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapisan Tipis | Running solvent adalah fasa bergerak kromatografi lapisan nipis. |
| Kromatografi Lajur | Wash buffer adalah fasa bergerak kromatografi lajur. |
| Mekanisme yang Digunakan untuk Pemisahan | |
| Kromatografi Kertas | Kromatografi kertas berdasarkan penyerapan pepejal-cecair. |
| Kromatografi Lapisan Tipis | Kromatografi lapisan nipis berdasarkan penyerapan pepejal-cecair. |
| Kromatografi Lajur | Kromatografi lajur berdasarkan pengecualian ukuran, cas dan bentuk. |
| Penyangga Elusi | |
| Kromatografi Kertas | Tidak diperlukan oleh kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapisan Tipis | Tidak diperlukan untuk kromatografi lapisan nipis. |
| Kromatografi Lajur | Diperlukan dalam kromatografi lajur. |
| Pengesanan | |
| Kromatografi Kertas | Pewarnaan dan dengan menentukan faktor Pengekalan. |
| Kromatografi Lapisan Tipis | Pewarnaan dan dengan menentukan faktor Pengekalan. |
| Kromatografi Lajur | Penentuan spektrofotometri. |
Ringkasan - Lapisan Tipis Kertas vs Kromatografi Lajur
Kromatografi kertas, TLC dan kromatografi lajur adalah teknik pemisahan yang digunakan untuk memisahkan biomolekul seperti protein, asid amino dan karbohidrat (terutamanya monosakarida). Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegun, dan mekanisme pemisahan didasarkan pada penjerapan pepejal-cecair. TLC juga menggunakan mekanisme penjerapan pepejal-cecair. Molekul dipisahkan pada fasa pegun, bergantung pada kelarutannya dalam fasa bergerak. Kromatografi lajur menggunakan sifat fizikal seperti saiz, bentuk, cas dan berat molekul sebatian untuk dipisahkan. Lajur yang dibungkus dengan bahan matriks berfungsi sebagai fasa pegun, sedangkan penyangga pencuci bertindak sebagai fasa pelarut. Ini adalah perbezaan antara lapisan nipis kertas dan kromatografi lajur.
