Perbezaan Utama - Ligasi Akhir Tumpul vs Melekit
Endonuklease sekatan adalah enzim spesifik yang memotong DNA untai dua (dsDNA). Mereka juga dikenali sebagai gunting molekul dalam biologi Molekul. Enzim sekatan dapat mengenali urutan pendek spesifik dsDNA yang dikenali sebagai laman pengiktirafan dan membelah ikatan fosfodiester dan hidrogen untuk membuka helai dua. Hasil pembelahan oleh enzim ini, serpihan DNA dihasilkan dengan pelbagai jenis hujung seperti hujung melekit dan hujung tumpul. DNA ligase adalah enzim yang digunakan dalam biologi Molekul untuk bergabung dengan dua helai DNA bersebelahan dengan membentuk ikatan baru. Langkah ini dikenali sebagai ligasi dan mengikut jenis ujung DNA yang diikat, mereka boleh disebut sebagai ligasi hujung tumpul dan ligasi hujung melekit. Perbezaan utama antara ligasi hujung tumpul dan melekit adalah bahawa ligasi hujung tumpul berlaku di antara serpihan DNA yang mengandungi dua hujung tumpul sedangkan ligasi hujung melekit berlaku antara 5 'dan 3' overhang. Berbanding dengan ligasi hujung tumpul, ligasi hujung melekit lebih cekap dan stabil.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Ligasi Akhir Tumpul
3. Apa itu Ligasi Akhir Melekit
4. Perbandingan Berdampingan - Ligasi Akhir Tumpul vs Lekap
5. Ringkasan
Apa itu Ligation Blunt End?
Beberapa endonuklease sekatan dapat memotong DNA pada pangkalan yang berlawanan dan menghasilkan serpihan DNA hujung yang tumpul. Enzim ini dikenali sebagai pemotong hujung tumpul; mereka berpaut terus ke tengah tapak larangan tanpa meninggalkan pangkalan gantung tunggal yang terdampar. Hujung tumpul juga dikenali sebagai hujung yang tidak terlalu tergantung kerana mereka tidak mempunyai pangkal gantung 3 'dan 5' di hujungnya. Kedua-dua helai berakhir dari pasangan asas di hujung tumpul. Enzim pemotongan hujung yang biasa ialah EcoRV HaeIII, AluI dan SmaI.
Ligasi hujung tumpul terlibat antara dua hujung tumpul. Ia bukan ligasi pangkalan yang menonjol. Ligasi ini kurang berkesan daripada ligasi hujung melekit. Walau bagaimanapun, dalam beberapa keadaan, ligasi hujung tumpul menjadi lebih menguntungkan daripada ligasi hujung yang melekit, terutama ketika menggunakan produk PCR. Produk PCR selalu dihasilkan dengan hujung yang tumpul. Ligasi hujung tumpul tidak memerlukan ujung pelengkap dalam DNA untuk ligasi.
Gambar 01: Penghasilan akhir yang tumpul oleh enzim Eco RV
Apa itu Ligasi Akhir yang Melekit?
Beberapa endonuklease sekatan dapat memotong dsDNA, meninggalkan sekeping DNA helai tunggal yang terlalu banyak di hujungnya. Hujung-ujung ini dikenali sebagai hujung yang melekit atau terlalu banyak. Ligasi hujung melekit berlaku di antara dua serpihan DNA yang mengandungi overhang yang sepadan kerana hujung melekit dimiliki dengan asas tidak berpasangan dan memerlukan asas pelengkap untuk membentuk ikatan. Oleh itu, perlu menggunakan enzim sekatan yang sama untuk kedua sumber DNA untuk menghasilkan serpihan ligasi yang sepadan.
Ligasi hujung melekit lebih cekap dan selalunya sangat diinginkan dalam proses pengklonan. Terdapat beberapa enzim sekatan yang menghasilkan hujung yang melekit. Mereka adalah EcoRI, BamHI, HindIII dll.
Gambar 02: Penghasilan akhir yang melekit oleh enzim Eco RI
Apakah perbezaan antara Blunt dan Sticky End Ligation?
Artikel Diff Tengah sebelum Jadual
Ligasi Akhir tumpul dan melekit |
|
| Ligasi hujung tumpul berlaku di antara dua serpihan DNA hujung tumpul. | Ligasi hujung melekit berlaku di antara dua serpihan DNA yang sepadan dengan hujung melekit. |
| Enzim | |
| Pemotong hujung tumpul menghasilkan hujung tumpul. | Pemotong hujung yang melekit menghasilkan hujung yang melekit atau padat. |
| Keperluan Akhir Pertandingan | |
| Ia tidak memerlukan serpihan yang sepadan atau asas pelengkap. | Ia memerlukan asas pelengkap di hujung untuk membentuk pasangan asas. |
| Kecekapan | |
| Ia kurang berkesan daripada ligasi hujung yang melekit | Ia lebih berkesan daripada ligasi hujung tumpul. |
Ringkasan - Ligasi Akhir Blunt vs Sticky End
Endonuklease sekatan mampu membelah dsDNA dan menghasilkan serpihan DNA dengan hujung yang berbeza. Mereka mengenali urutan tertentu dan menyekat DNA menghasilkan hujung yang melekit dan tumpul. Hujung yang melekit mempunyai pangkalan yang tidak berpasangan di hujung serpihan. Hujung tumpul diciptakan kerana belahan lurus dan mereka mempunyai pasangan asas di hujungnya. Ligasi hujung melekit memerlukan dua kepingan DNA helai tunggal pelengkap. Ligasi hujung tumpul berlaku di antara dua pecahan hujung tumpul. Inilah perbezaan antara ligasi tumpul dan melekit.
